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細(xì)胞技術(shù)專題:光學(xué)顯微鏡檢測(cè)腫瘤細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)

瀏覽次數(shù):1478 發(fā)布日期:2014-2-20  來源:上海北諾生物科技有限公司

光學(xué)顯微鏡檢測(cè)腫瘤細(xì)胞形態(tài)可以:(1)輔助判斷腫瘤細(xì)胞是否凋亡;(2)用于病理檢查;(3)提取腫瘤細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)信息。

實(shí)驗(yàn)方法
  • 瑞氏-吉姆薩混染法
  • HE染色法
實(shí)驗(yàn)方法原理
吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。
 
1)嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)果,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);
2)細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì);
3)中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。
 
PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均分布蛋白質(zhì),由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液PH而定,在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,易與伊紅結(jié)合,染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)或天青結(jié)合,染色 偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感,染色用玻片必須清潔,無酸堿污染。配制必須用優(yōu)質(zhì)甲醇,稀釋染色必須用緩沖液,沖洗用水應(yīng)近中性,否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常,以致識(shí)別困難,甚至造成錯(cuò)誤。
 
用途:適合大多數(shù)細(xì)胞組織的染色,包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養(yǎng)細(xì)胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)等。
實(shí)驗(yàn)材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實(shí)驗(yàn)步驟
一、試劑配制
 
1.  瑞氏染液配制
 
稱瑞氏染料0.1 g于研缽,少量多次加入AR級(jí)甲醇至完全溶解,后補(bǔ)充至60 ml棕色瓶密封保存,可加3 ml甘油防止揮發(fā)。
 
2.  吉姆薩染液配制
 
0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶?jī)?nèi),56度,水浴90-120 min,當(dāng)染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇,充分搖勻后過濾,棕色瓶室溫可保存一周。
 
二、染色

1.  收集細(xì)胞制成懸液后涂片、晾干。懸浮培養(yǎng)細(xì)胞離心收集。貼壁細(xì)胞可直接培養(yǎng)在載玻片上。組織取材需機(jī)械零散。

2.  固定:以甲醇固定10 min.
 
3.  液化精液2 000/ rmin 離心10 min,等滲鹽水洗3遍,涂片后自然干燥。
 
4.  臨用前,瑞、吉染液按10:1混合,染色30-60 s。
 
5.  加等量PBS(pH6.9),再染10 min。
 
6.  自來水沖洗,自然干燥后,即可鏡檢,也可直接香柏油兼做透明與封片。
發(fā)布者:上海北諾生物科技有限公司
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