366nm大腸埃希氏菌測(cè)定熒光觀察儀使用方法
366nm檢測(cè)用紫外燈, 用于水及食物中的微生物檢測(cè)，如水中大腸埃希氏菌在含MUG 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，即會(huì)產(chǎn)生熒光反應(yīng)也可用于實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)及化合物的檢測(cè)。 大腸埃希氏菌定義
大腸埃希氏菌是指能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養(yǎng)液呈黃色，能產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的細(xì)菌。
大腸埃希氏菌是指能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養(yǎng)液呈黃色，能產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的細(xì)菌。
檢測(cè)重要性
《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》GB/T 5750-2006中將大腸埃希氏菌列入檢測(cè)項(xiàng)目中。并在解讀《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB5749-2006中闡述：“只有埃希氏大腸桿菌是糞源特異性的，是最準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示”。
二、用途 ：
大腸埃希氏菌測(cè)定熒光觀察使用方法：將臺(tái)式紫外光燈置于暗處，插上電源，將經(jīng)過(guò)24小時(shí)培養(yǎng)后的EC-MUG管在燈下照射，如有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則為大腸埃希氏菌陽(yáng)性管；
三、注意事項(xiàng)：
每次觀察時(shí)，用一個(gè)沒(méi)開(kāi)封的EC-MUG管和被測(cè)的EC-MUG管在紫外光燈同時(shí)觀察，如果被測(cè)的EC-MUG管產(chǎn)生熒光，在紫外光燈下與沒(méi)開(kāi)封的EC-MUG管比較，有明顯的區(qū)別。每次測(cè)試完后將電源拔掉。
四、具體方法:取供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g、1ml）,直接或處理后接種至適量(不少于100ml)的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,培養(yǎng)18--24小時(shí),必要時(shí)可延長(zhǎng)至48小時(shí).
取上述培養(yǎng)物0.2ml,接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi),培養(yǎng),于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外線下觀察,同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照.若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光,為MUG陽(yáng)性,不呈現(xiàn)熒光,為MUG陰性.觀察后,沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液,液面呈玫瑰紅色,為靛基質(zhì)陽(yáng)性,呈試劑本色,為靛基持陰性.本底對(duì)照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性.
如MUG陽(yáng)性,靛基質(zhì)陽(yáng)性,判供試品檢出大腸埃希菌;
取上述培養(yǎng)物0.2ml,接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi),培養(yǎng),于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外線下觀察,同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照.若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光,為MUG陽(yáng)性,不呈現(xiàn)熒光,為MUG陰性.觀察后,沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液,液面呈玫瑰紅色,為靛基質(zhì)陽(yáng)性,呈試劑本色,為靛基持陰性.本底對(duì)照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性.
如MUG陽(yáng)性,靛基質(zhì)陽(yáng)性,判供試品檢出大腸埃希菌;
如MUG陰性,靛基質(zhì)陰性,判供試品未檢出大腸埃希菌;如MUG陽(yáng)性,靛基質(zhì)陰性,或MUG陰性,靛基質(zhì)陽(yáng)性,則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上,培養(yǎng)18--24小時(shí).
若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng),或生長(zhǎng)的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出大腸埃希菌.若平板上生長(zhǎng)的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似,應(yīng)進(jìn)行分離,純化,染色鏡檢和適宜的生化試驗(yàn),確認(rèn)是否為大腸埃希菌.
大腸菌形態(tài)特征
曙紅亞甲藍(lán):呈紫黑色、淺紫色、藍(lán)紫色或粉紅色,菌落中心呈深紫色或無(wú)明顯暗色中心,圓形,稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，常有金屬光澤
若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng),或生長(zhǎng)的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出大腸埃希菌.若平板上生長(zhǎng)的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似,應(yīng)進(jìn)行分離,純化,染色鏡檢和適宜的生化試驗(yàn),確認(rèn)是否為大腸埃希菌.
大腸菌形態(tài)特征
曙紅亞甲藍(lán):呈紫黑色、淺紫色、藍(lán)紫色或粉紅色,菌落中心呈深紫色或無(wú)明顯暗色中心,圓形,稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，常有金屬光澤
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