一 操作

1 醋酸纖維薄膜的預(yù)處理

A 在膜片的無光澤面上用鉛筆輕輕地畫一條加樣線。加樣線可選在距膜片一端2CM處。

B 在一培養(yǎng)器內(nèi)裝入電極緩沖液，將膜片小心地浮鋪在電極緩沖液面上，一般是將膜片的無光澤面朝下。膜片的底面吸收電極緩沖液后便逐漸下沉，直至電極緩沖液將膜片完全浸沒。

C 待膜片在電極緩沖液內(nèi)浸透數(shù)分鐘后，用鈍頭鑷子取出，夾在兩層濾紙之間以吸去多余的電極緩沖液，但不可過干。

D 在膜片無光澤面的加樣線上進(jìn)行加樣，通常作線形加樣，不作點(diǎn)狀加樣。用印模（長15mm，寬3mm的有機(jī)玻璃）蘸取血清蛋白樣品“印蓋”在加樣線上。印蓋時(shí)，注意印模兩端到膜片邊緣之間的距離基本相等。

E 樣品的加樣量或加樣體積隨樣品的濃度，染色和檢定方法等條件的不同而有較大的變化，通常每條加樣線上加0.5mg蛋白質(zhì)樣品的量，如印蓋一次不足量，可在原位再印蓋一次。

F 用鈍頭鑷子將加過樣的膜片安放在電泳槽膜支架上，膜片兩端約10mm的部分與支架的頂面緊貼，醋酸纖維素膜依靠自身在電極緩沖液中的粘著力會緊繃在電泳槽兩端的膜支架上。在同一電泳槽內(nèi)同時(shí)安放幾張膜片，相鄰膜片之間應(yīng)相距3mm以上。

G 在電泳槽的兩個(gè)電極室內(nèi)注入適量的電極緩沖液，用長40mm濾紙2~3層作搭橋，濾紙條一端與支架前沿對齊，另一端侵入電泳槽的緩沖液。待濾紙條濕潤后，去除氣泡，使濾紙緊貼于支架上。

H 用鈍頭鑷子將加過樣的膜片安放在電泳槽的支架上，加過樣的一端平貼在負(fù)極端支架，另一端平貼在正極端支架，呈繃狀態(tài)。

I 蓋上電泳槽蓋，讓膜片在電泳槽內(nèi)水平靜置平衡10分鐘。然后將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀直流電源的正負(fù)極分別相接。

J 通上電源讓電泳儀工作在穩(wěn)壓狀態(tài)，電壓調(diào)至120~160V，相當(dāng)于電場強(qiáng)度為15~20V/cm，也可讓電泳儀工作在穩(wěn)流狀態(tài)，電流強(qiáng)度視膜片多少而定，一般每厘米膜寬電流強(qiáng)度控制在0.4~0.8mA。電泳時(shí)間50~70min。

K 醋酸纖維素膜電泳通常在室溫下進(jìn)行。提高電場強(qiáng)度，可加快電泳速度。但在單位時(shí)間內(nèi)膜上產(chǎn)生的熱量也越高，導(dǎo)致緩沖液的大量蒸發(fā)，所以需要有效地冷卻，避免膜片干燥。通常在冷卻槽里放置自來水，冷鹽水和冰塊不斷冷卻。

L 電泳完畢。

M 將膜片浸入為止。

N 注意事項(xiàng)

1 膜片電泳前的預(yù)處理

 醋酸纖維素膜對水的親和力比紙小，電泳時(shí)要保證膜片上含有一定量的緩沖液，必須預(yù)先將膜片在緩沖液中浸透。浸膜的正確方法應(yīng)該是將膜片小心地浮鋪在緩沖液的表面上，依靠膜片的底面逐漸吸收緩沖液然后下沉到緩沖液中。如果一開始就將膜片全部浸沒，膜片上會聚集許多小空氣泡從而形成許多不透明的斑點(diǎn)，這就需要很長時(shí)間才能將膜片浸透，不僅浪費(fèi)時(shí)間而且影響以后的分離效果。此外，膜片浸透后用濾紙吸去多余的緩沖液時(shí)既不能吸得太干也不能過濕。太干，不利于電泳分離；太濕，會影響加樣，使樣品線條擴(kuò)散變寬，電泳時(shí)各組分的起始點(diǎn)參差不齊，從而影響分離效果。

2 電極緩沖液濃度的選擇

常用的pH8.6巴比妥緩沖液，其濃度一般都是在0.05mol/L到0.09mol/L之間進(jìn)行選擇的。選擇時(shí)，先初步定上某一濃度，例如電泳槽內(nèi)兩極之間的膜條長度為8~10cm，每厘米膜長需要有電壓25V，電流強(qiáng)度要求每厘米膜寬為0.4~0.5mA。如果電泳時(shí)達(dá)不到或超過這個(gè)值，就應(yīng)增加緩沖液濃度或進(jìn)行稀釋。緩沖液濃度過低，所造成的影響是區(qū)帶移動(dòng)速度過快、區(qū)帶寬度增大；緩沖液濃度過高，會使區(qū)帶移動(dòng)速度過慢，從而導(dǎo)致某些分離區(qū)帶過于集中不易分辨。需要特別指出的是，在醋酸纖維素膜電泳中，由于電流的大部分是由樣品傳導(dǎo)的，因此會產(chǎn)生很多的熱。有時(shí)所選擇的緩沖液濃度認(rèn)為是比較合適的，但是在環(huán)境溫度升高或使用較高的電壓的情況下，水份的熱蒸發(fā)作用加劇，也可造成緩沖液濃度過高，甚至使膜片干涸的后果。

    注：醋酸纖維膜片規(guī)格為70*90