普瑞邦芝麻黃曲霉素總量檢測的解決方案

【進(jìn)口芝麻檢出黃曲霉毒素超標(biāo)】新年初，黃島檢驗檢疫局發(fā)布近期進(jìn)出口檢驗檢疫情況，進(jìn)口芝麻中檢出了黃曲霉毒素超標(biāo)等情況受到關(guān)注。芝麻是我國主要油料作物之一，且芝麻營養(yǎng)豐富，成為多種食品的主要材料。中國即成為芝麻生產(chǎn)與消費(fèi)大國。目前我國年食用和加工芝麻約需要110萬噸，但芝麻年生產(chǎn)量只有65萬-70萬噸，產(chǎn)不足需導(dǎo)致2013年前9個月我國芝麻進(jìn)口量大增。海關(guān)、出入境檢驗檢疫等部門對芝麻檢測量逐漸增大。

然而，芝麻也是容易感染黃曲霉的農(nóng)作物之一，黃曲霉毒素對芝麻產(chǎn)品具有較高的親和性。黃曲霉毒素具有極強(qiáng)的致癌性和毒性，黃曲霉菌的侵染和產(chǎn)生不僅發(fā)生在芝麻產(chǎn)品的種植、成熟、收獲期中，而且在收獲的晾曬、存儲及其以后的加工、儲運(yùn)等加工過程中也會產(chǎn)生。我國芝麻種植面積大，地域廣泛，且目前我國農(nóng)村芝麻種植地區(qū)尚未實施備案管理或認(rèn)證資質(zhì)，國家相關(guān)部門無法進(jìn)行完全控制。此外，我國從國外進(jìn)口的芝麻也有質(zhì)量問題，近期，檢驗檢疫局連續(xù)檢出進(jìn)口芝麻不合格，黃曲霉毒素超標(biāo)情況受到關(guān)注。

Pribolab(普瑞邦)作為專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商之一，整合了原北京泰樂祺檢測應(yīng)用實驗室，專注于霉菌毒素檢測產(chǎn)品和技術(shù)解決方案的服務(wù),以期快速提出解決方案。針對芝麻中黃曲霉素總量的檢測，以穩(wěn)定、準(zhǔn)確、快速、簡單為導(dǎo)向，建立了一套完整的解決方案。

參考標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)國標(biāo)《GB/T18979-2003》食品中黃曲霉毒素的測定標(biāo)準(zhǔn)。

（一）免疫親和柱-高效液相色譜法：GB/T18979-2003國標(biāo)方法

1. 所需設(shè)備和耗材　　

高效液相色譜儀

色譜柱：真菌毒素專用色譜柱（PRC-18，Pribolab）。

免疫親和柱：PriboFast®黃曲霉毒素總量免疫親和柱(3ml，25支/盒，IAC-011-3，Pribolab，快速過柱型)。

高速均質(zhì)器：達(dá)到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。

玻璃纖維濾紙：PriboFast®玻璃纖維濾紙（GMF-110，Pribolab）

PriboFast®八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫親和柱過柱流速）

標(biāo)準(zhǔn)品：黃曲霉毒素混標(biāo)（2µg/ml 黃曲霉毒素 B1, G1 和0.5µg/ml黃曲霉毒素B2, G2 (4/1/4/1)，STD#1081，Pribolab）

2. 樣品前處理:普瑞邦針對糧谷、油脂、油料等提供不同的處理方案(詳細(xì)方案請聯(lián)系普瑞邦，普瑞邦開發(fā)了針對不同產(chǎn)品提供優(yōu)化的處理方案)

3. 免疫親和柱凈化: 

富集:提取液以2-3mL/min流速通過免疫親和柱，直至2-3mL空氣通過柱體；

洗滌: 10mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL空氣通過柱體。

洗脫：加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,孵育30秒以上,以流速為1-2mL/min過柱，收集全部洗脫液供檢測用。

4. 高效液相色譜分析                         

（二）酶聯(lián)免疫法

1. 方法原理

采用直接競爭酶聯(lián)免疫法，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素特異抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的抗原與預(yù)包被在板孔上的抗原競爭結(jié)合酶標(biāo)抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含黃曲霉毒素總量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣品中黃曲霉毒素總量的含量。

2. 試劑和材料：酶聯(lián)免疫試劑盒（PriboFastR黃曲霉毒素總量試劑盒EKT-011，Pribolab）

3. 樣本前處理：芝麻及其制品：粉碎、溶解、離心取上清液待測。

4. 檢測步驟

4.1 免疫反應(yīng)30min；洗板5次；顯色反應(yīng)30min；終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀OD值。

5. 分析結(jié)果的表述

用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果。

（三）免疫金標(biāo)快速檢測法

1. 方法原理

黃曲霉毒素總量快速檢測條應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的黃曲霉毒素總量在酶標(biāo)孔中與膠體金標(biāo)記的特異性抗黃曲霉毒素單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測線上AF－BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中黃曲霉素總含量大于0.5 ug/L，檢測線不顯顏色，結(jié)果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結(jié)果為陰性。

2. 試劑和材料

膠體金檢測試紙：PriboStripTM黃曲霉毒素總量免疫金標(biāo)快速檢測條（PR-011，Pribolab）

3. 分析步驟：芝麻及其制品溶解后取上清液檢測。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結(jié)果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結(jié)果。