蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血漿游離血紅蛋白測定
實驗原理
血紅蛋白具有類過氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態(tài)氧，使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化，由無色最終變?yōu)樗{紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進行比較，可測出其含量。
實驗方法
材料：
1．2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
2．1%H2O2
3．10%醋酸溶液
4．分光光度計
方法：
1.抽取靜脈血2-3ml，枸櫞酸鈉抗凝，離心分離血漿。
2．按下表進行操作，用分光光度計，波長為530nm，以空白管調(diào)零，測定測定管的吸光度。
3.計算公式
|
試劑 （ml） |
測定管 |
空白管 |
|
2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液 |
0.5 |
0.5 |
|
患者血漿 |
0.02 |
/ |
|
1% H2O2 |
0.5 |
0.5 |
|
混勻后室溫放置10min | ||
|
10%醋酸溶液 |
5.0 |
5.0 |
|
室溫放置10min | ||
3.計算公式
血漿游離Hb(mg/L)=測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100
實驗結(jié)果計算
參考范圍：0-40mg/L
注意事項
1.一切容器避免血紅蛋白污染；
2.采血要順利，器皿要干燥，檢測血漿要新鮮，及時分離，防止人為溶血；
3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性，檢測時要小心，廢液要妥善處理，以免污染；
4.雙氧水要新鮮配置，濃度要準(zhǔn)確。
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