植物細胞培養具有周期長、細胞抗剪切能力弱、易團聚等特點。同時,植物細胞規模培養的目的是生產天然產物,而這些天然產物均為細胞次生代謝物。所以,植物細胞培養反應器的設計,不僅要考慮有利于細胞生長,同時還要考慮有利于產物的積累和分離。總體上講,適合植物細胞的反應器應該具有適宜的氧傳遞、良好的流動性和較低的剪切力。根據不同植物細胞生長和代謝產物積累的特點,目前已研究設計出多種類型的反應器用于植物細胞培養。
一、懸浮培養生物反應器
1機械攪拌生物反應器
盡管機械攪拌反應器已成功用于許多細胞的培養中,反應器內的溫度、pH、溶氧及營養物質濃度較其他反應器更易控制等優點,但由于機械攪拌造成的剪切力對植物細胞造成較大的損傷,對次級代謝產物的合成也會產生影響,同時會帶來染菌和機械上的問題,因此需篩選出抗剪切力的細胞系,也可對反應器結構進行改造,尤其是攪拌槳的結構和類型的改進,使其具有緩和、充分的攪拌效果。
2非機械攪拌式反應器
植物細胞的培養比較多地采用各種非機械攪拌生物反應器,其中常用的是氣體攪拌生物反應器。氣體攪拌生物反應器沒有活動的攪拌裝置,在很大程度上減少了剪切力,并能在長期操作中保持無菌。氣體攪拌生物反應器包括鼓泡塔和氣升反應器等。氣體攪拌生物反應器結構較簡單,氧傳遞效率高,剪切力低,對細胞的損傷小,容易實現長期無菌培養,較適用于植物細胞培養。
缺點:操作彈性小,低氣速時尤其在培養后期細胞密度較高時,混合效果較差。如果提高通氣量,又會產生大量泡沫,也易于驅除培養液中的二氧化碳和乙烯,對細胞生長有阻礙作用。過高的溶氧對植物細胞合成次級代謝產物不利。
二、固定化細胞生物反應器
1填充床生物反應器
細胞可以位于支撐物表面,也可包埋于支撐物之中,培養液流經支撐物顆粒,不斷被細胞利用。優點:單位體積固定細胞量大。缺點:混合效果低,對必要的氧傳遞、pH、溫度控制和氣體產物的排除造成困難,影響細胞的培養。
2流化床生物反應器
利用液體的能量來懸浮顆粒。顆粒呈流化狀態所需的能量與顆粒大小成正比,因此常采用小固定化顆粒,這些小顆粒良好的傳質特性是流化床反應器的優點,缺點:剪切力和顆粒碰撞會損壞固定化細胞。
3膜生物反應器
采用具有一定孔徑和選擇透性的膜固定植物細胞。營養物質通過膜滲透到細胞中,細胞產生的次級代謝產物通過膜釋放到培養液中。主要有:中空纖維反應器和螺線式卷繞反應器,優點:可以重復使用。
三、植物細胞反應器的選擇和設計
植物細胞反應器的選擇和設計需注意:
1氧的供給對于間歇培養,體積溶氧系數klα需要10-15h-1;
2剪切力反應器的剪切力盡可能小;
3細胞的黏附細胞培養過程容易黏附在反應器壁上,并產生大量的泡沫,導致細胞量和代謝產物減少,嚴重時培養過程被迫中止;
4細胞高密度培養時,混合情況變差,培養基中營養物質和氧的供給不足,細胞收率下降;
5溫度、pH、營養物質的濃度須控制在合適的范圍內。