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蛋白測序服務(wù)基于Edman降解法。一個循環(huán)由一個完整的化學(xué)降解過程和即時的HPLC分析組成,一個循環(huán)可測定一個氨基酸。
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蛋白測序服務(wù):
蛋白測序現(xiàn)在已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗中一個非常重要的實驗工具。齊氏生物科技推出的蛋白測序服務(wù)基于Edman降解法。一個循環(huán)由一個完整的化學(xué)降解過程和即時的HPLC分析組成,一個循環(huán)可測定一個氨基酸。
一、樣品制備:
1、PVDF膜結(jié)合的樣品(請?zhí)峁┱ぃ?br />
2、HPLC純化后的凍干粉樣品。
二、樣品建議:
1、樣品不能含有下列會干擾蛋白測序的物質(zhì): 去污劑(Detergents)/ 鹽分(Salts)/ 非揮發(fā)性緩沖液(Non volatile buffers) / 胺(Amines)/氨基酸(Amino acids);
2、表面吸附往往會導(dǎo)致樣品的回收率較低,需要避免因吸附而導(dǎo)致樣品丟失,下面有一些小竅門有助于解決這個問題:
1)避免透析;2)不要讓樣品干透;3)用盡可能小的管;4)特殊的疏水性蛋白最多可加SDS至0.05 %以減少吸附損失。
3、在SDS-PAGE 電泳純化蛋白時,注意下面一些事項:
1)每三至四周配置一次丙烯酰胺儲液;2)聚合過夜使膠聚合充分;3)用盡可能薄的膠來分離
4、上樣之前預(yù)電泳數(shù)分鐘,充分上樣;
5、 使每條帶能有1-5 ug的目的蛋白。
三、客戶提供樣品的信息:
1、至少提供20pmol的量,最好提供50-100pmol,以便我們有足夠的量進(jìn)行重復(fù)測序;
2、最少達(dá)到75%的純度(基于摩爾數(shù));
3、不能含有任何非揮發(fā)性的緩沖液,避免氨基酸污染(Tris-glycine緩沖體系不合適 );
4、客戶期望測得的氨基酸個數(shù) / 分子量 / 組織來源 / 制備方法等。
四、蛋白測序報價:
開機(jī)費:¥1500元,含前5個氨基酸測序的費用;此部分款項需預(yù)付,無結(jié)果不再退還。
每循環(huán):¥200元。
例如,一個樣品,測N端15個氨基酸,預(yù)期費用為1500+(15-5)* 200 = ¥3500元