務內容：
1、攜帶目的基因的重組腺病毒的制備；
2、攜帶多個目的基因的重組腺病毒的制備；
3、攜帶報告基因的重組腺病毒的制備（本公司提供攜帶綠色熒光蛋白基因和熒光素酶Luc＋基因的重組腺病毒，還可根據客戶需要進行制備）；
4、攜帶干涉序列的重組腺病毒的制備；
具體操作：
1、目的基因的獲取：
（1）特定細胞表達的目的基因：提取RNA后進行反轉錄，PCR擴增；
（2）載體中含有的目的基因：酶切或PCR獲取；
（3）融合蛋白基因：根據需求，進行PCR合成目的基因；
2、穿梭質粒的構建：
（1）攜帶目的基因的穿梭質粒的構建：通過酶切、連接的方式得到，一般采用的是pShuttle-cmv載體；
（2）攜帶多個目的基因的穿梭質粒的構建：如同時表達兩個目的基因，可通過IRES將兩個目的基因相連；
（3）攜帶干涉序列shRNA的穿梭質粒：首先將H1啟動子構建到pShuttle質粒上，然后將目的基因克隆到H1啟動子下游；
3、重組腺病毒質粒構建：
攜帶目的基因的穿梭質粒線性化后與Adeasy-1共轉BJ5183感受態細胞（電轉），篩選得到重組腺病毒質粒，并經PacI酶切鑒定：可見目的質粒出現兩條條帶，分別為3.0kb或4.5kb和>23Kb兩條條帶。 將得到的重組腺病毒質粒轉染DH5a感受態細胞，以便于保存。
4、重組腺病毒的制備：
將PacI酶切線性化的高純度高濃度重組腺病毒質粒，以脂質體介導的方式轉染293細胞，7～10天出現噬斑，待完全病變后，收集細胞和上清，于-70℃保存。
5、重組腺病毒的鑒定
在基因水平，提取腺病毒基因組DNA，采用目的基因的引物，PCR擴增病毒基因組DNA；并采用相應的引物，檢測是否含有復制型腺病毒。
在蛋白水平，分泌蛋白，采用ELISA檢測目的基因的表達；膜蛋白采用流式方法進行檢測；其他蛋白采用Western-blot方法進行檢測。
6、病毒擴增及純化：
根據實驗的需要擴增重組腺病毒（細胞實驗20～40皿；動物實驗60～80皿），并采用氯化銫密度梯度離心法進行純化，純化得到的病毒用10％甘油保存。
7、病毒滴度測定：
紫外分光光度法檢測病毒的OD260和280值：根據OD260nm可推算病毒的顆粒滴度； OD260nm/OD280nm代表病毒的純度。
同時，采用快速CPE和TCID50測定病毒的感染滴度。
服務承諾：
1、從得到cDNA到完成純化的時間在60個工作日之內；
2、得到的純化病毒純度（OD260nm/OD280nm）在1.2~1.4之間，總量大于1×1010pfu；
3、提供詳細的實驗報告和重要的中間產物（重組腺病毒質粒和原始病毒）；
客戶須知：
1、客戶如需要進行蛋白水平的鑒定，另行商議實驗周期；
2、實驗周期不包含TCID50檢測時間，一般需要10個工作日。
服務價格：
詢價。
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