基因表達的精確定量是通過ABI7000/7500,羅氏4800實時定量PCR熒光檢測系統來實現的，其主要原理是將目的片斷擴增到一定量時需要的PCR循環數（Ct）跟加入的DNA模板濃度對數成線性相關。根據檢測熒光來源的不同，實時定量PCR可以分為兩種，一種是通過Taqman探針來實現，而另一種是通過SYBR嵌入DNA雙鏈發光原理來實現。兩種PCR體系都能產生高重復性的實驗結果，但Taqman探針的訂購需要較長時間。基因表達量的校正有兩種方式，一種通過比較候選基因與參照基因達到一定量擴增產物時的Ct值來實現（ΔCt）， 另一種是利用標準樣本構建濃度與Ct值相關曲線，分別確定候選基因與參照基因的絕對表達濃度，然后通過比較這兩個濃度值來確定候選基因相對參照基因的表達量。前一種方法由于不同基因片斷擴增效率不等或擴增效率未知，故不能準確估計目標基因相對參照基因的表達比例，對于后一種方法，可以去除不同基因片斷擴增效率不等的影響，而且如果采用標準樣本，既可以準確獲得目標基因相對參照基因的表達比例，也可以準確知道目標基因在cDNA中的絕對含量。

本公司推薦采用SYBR定量PCR試劑以及利用標準曲線的基因表達校正方法.

以下是該方法簡要示意圖：

客戶需要提供：
1）用1μg DNase I純化后的總RN反轉錄后獲得的cDNA，一般為20μl體系；
2）需要定量的目標基因以及用于校正的參照基因信息。

我們提供的服務內容：
1）SYBR實時定量PCR試劑的訂購；
2）定量PCR引物的設計、合成與優化；DNA樣本的質檢與標化；
3）目的基因及參照基因的絕對定量PCR；
4）絕對定量數據的整理以及目標基因相對參照基因的表達分析；
提供給客戶的結果報告將包括原始數據文件、實驗步驟、絕對定量數據以及表達校正結果等
完成期限：
引物的設計、合成及優化需10個工作日；1000個實時PCR反應體系需5個工作日。
檢測費用：請來電詢價
檢測實例：

Gene X 絕對定量界面