抑制性消減雜交(suppression subtractive hybridization, SSH)技術是一種鑒定、分離組織細胞中選擇性表達基因的技術. 其原理是以抑制性多聚酶鏈反應(PCR)反應為基礎的cDNA 消減雜交技術. 通過合成兩個不同的接頭,連接于測試cDNA 片段的5’末端,達到選擇
性擴增差異性表達的cDNA 片段,抑制非目的cDNA 的擴增. 該技術與其他消減雜交技術相比具有假陽性率低、敏感性高、效率高等優點而得到廣泛應用。
基本流程:通過差減文庫構建,文庫驗證和篩選 ( 逆向斑點雜交 ) ,獲得陽性克隆 (表達差異基因),對陽性克隆測序及生物信息分析,可判定差異基因的情況。另外結合 RACE及 RT-PCR 、 Northern blot 或實時定量 PCR 可進一步克隆并驗證所獲得的差異基 因cDNA全長序列。
成功案例:已經成功構建過人,大鼠,小鼠,鯉魚,多寶魚,紅樹,百合,土豆,香蕉, 海洋藻類 …… 等十幾個物種的差減文庫。通過以上工作逐步建立起規范的服務標準和 可控的質量體系,技術日臻成熟。注意事項:客戶需提供實驗所需的樣品(組織,細胞或 RNA )。樣品需求量:組織( 200~ 400mg ),細胞( 10^7 ) , 總 RNA(>10ug) , mRNA ( >1ug )
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