玉華公司提供多套酵母雙雜交系統,上海玉華生命科技發展有限公司">
酵母雙雜交系統是一種直接在真核細胞內檢測蛋白相互作用的方法,具有靈敏度高和特異性好的優點。玉華公司提供多套酵母雙雜交系統,
1.Clontech公司基于GAL4轉錄因子特性建立的一套系統,可用于檢測多種蛋白-蛋白間的相互作用,是一種有效的檢測方法。
2.Stratagene CytoTrap 雙雜交系統可以稱作是酵母細胞質雙雜交系統,是在Ras 途徑的基礎上建立的,可對胞質蛋白、膜蛋白、轉錄因子、inhibitors作為bait蛋白進行酵母雙雜交
一、客戶提供材料
客戶可提供載有誘餌基因的質粒;也可提供基因名稱,登錄號。
二、誘餌基因載體構建
1) 亞克隆
2) 將誘餌基因構建至BD載體中,測序確保無突變;
3) 檢測BD載體中誘餌蛋白的表達,SDS-PAGE電泳及Western-blot檢測;檢測誘餌蛋白是否有毒性;是否存在自激活現象。
三、文庫篩選
1)使用公司具有的篩選文庫,或者應客戶要求購買文庫(有時客戶自己提供特制的文庫),文庫篩選,陽性克隆;
2)抽提質粒,共轉化再次驗證陽性克隆;
3)排除假陽性,對克隆進行測序及生物信息學分析。
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