服務優勢

酵母雙雜交實驗原理：

以Gal4 系統為例，BD和AD 分別由Gal4 蛋白上不同的兩個結構域(1-147aa 與768-881aa)構成。在利用GAL4 系統篩選cDNA 文庫或研究蛋白間的相互作用時，DNA 結合結構域與靶蛋白即"誘餌"相結合，轉錄活化結構域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結合。一般情況下，單獨的BD 可以與GAL4 上游活化序列（GAL UAS）結合但不能引起轉錄，單獨的AD 則不能與GAL UAS 結合；只有當BD 與 AD 分別表達的融合蛋白由于相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時，BD 與AD 才能與 GAL UAS結合并且引起報道基因的轉錄，從而激活下游報告基因，通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

酵母單/雙雜交檢測服務項目列表

酵母單雜交文庫構建服務

酵母單雜交體系能在一個簡單實驗過程中，識別與DNA特異結合的蛋白質，同時可直接從基因文庫中找到編碼蛋白的DNA序列，而無需分離純化蛋白，實驗簡單易行。為了獲得良好的酵母單雜交篩選實驗結果，構建酵母單雜的文庫至關重要，我們可以依據不同的實驗需要及物種特性，選擇不同的體系建庫方法，我們的技術專家可以熟練的應用Clonetech的SAMRT方法和life的gateway方法建立，同時，鐘鼎的技術專家也開發出了基于同源重組原理的建庫方法。

酵母單雜交文庫構建實驗流程： 
1.RNA提取 
2.mRNA提取 
3.cDNA的酶促法合成
4.cDNA連接接頭 
5.cDNA按長度分離 
6.cDNA與酵母單雜交文庫載體p重組 
7.重組產物電轉化 
8.文庫檢測以及質粒提取

酵母單雜交文庫構建實驗材料要求： 
客戶構建指定的酵母單雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可： 細胞樣本：細胞數量大于1*10^7； 動物樣本：大于1g； 植物樣本：大于2g； 總RNA：大于200ug。

產品質量標準：
原始文庫庫容量大于1*10^7CFU；
平均插入片段大于1000bp ；
克隆陽性率大于95%。

酵母單雜交文庫篩選技術服務

在研究DNA—蛋白質相互作用中，酵母單雜交體系主要有以下3種用途：①確定已知DNA—蛋白質之間是否存在相互作用；②分離結合于目的順式調控元件或其他短DNA結合位點蛋白的新基因；③定位已經證實的具有相互作用的DNA結合蛋白的DNA結合結構域，以及準確定位與DNA結合的核苷酸序列。

客戶僅提供用于篩選的誘餌質粒信息，我們完成雜交篩選相關工作
1.誘餌載體的構建
2.誘餌質粒的自激活檢測
3.文庫質粒和誘餌質粒共轉酵母感受態細胞
4.文庫篩選和3AT優化
5.文庫篩選結果測序分析
6.篩選結果回轉驗證
7.詳細報告的整理和數據發送

試驗完成后提供完整的實驗報告，包含實驗原始圖片，陽性克隆，測序鑒定結果，質粒及菌株等。

核蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術服務

鐘鼎生物的核蛋白體系酵母雙雜交服務可以選擇使用life的pDEST22和clonetech的pGADT7兩套系統進行篩選，篩選文庫可以使用預制商業化文庫或者本公司定制構建的酵母雜交文庫。 
需要指出的是，融合體蛋白必須轉運至核內才能活化轉錄，因此對于胞外配體-受體作用以及需要核外修飾或受磷酸化等翻譯后修飾過程介導的蛋白質間相互作用而言，該系統的應用受到一些限制。在進行文庫篩選時，假陽性結果常常干擾實驗的準確性，除某些文庫編碼的蛋白質本身含有轉錄活化成分外，細胞內的其它無關蛋白也可能有類似作用，因此雙雜交系統檢測的結果必須通過其它蛋白間相互作用的實驗來進一步驗證。

客戶只需提供用于篩選的誘餌質粒信息，我們完成雜交篩選相關工作：
1.誘餌載體的構建
2.誘餌質粒的自激活檢測
3.文庫質粒和誘餌質粒共轉酵母感受態細胞
4.文庫篩選和3AT優化
5.文庫篩選結果測序分析
6.篩選結果回轉驗證
7.詳細報告的整理和數據發送

膜蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術服務

該系統的原理是利用連接有泛素(ubiquitin)的蛋白能夠被泛素特異性的蛋白酶(UBPs)識別并切割下泛素，而這種特異性切割只在泛素能夠正確折疊的前提下發生。在正常情況下，泛素斷裂成兩部分后在體內能自發結合成可被UBPs識別的重構泛素，而當有突變發生時，即泛素的N端發生Ile13/Gly13的突變,這種斷裂泛素的重構就無法進行。只有當與斷裂的泛素的兩部分分別連接一個蛋白，且兩個蛋白之間存在相互作用，斷裂泛素的重組又得以恢復。斷裂泛素重組的發生能將連接在泛素C端的轉錄因子切割并進入細胞核內激活報告基因的轉錄表達，通過報告基因是否表達，可以檢測兩個蛋白之間是否存在相互作用

基于分離的泛素(split-ubiquitin)介導的膜蛋白酵母雙雜交系統，區別于傳統的核蛋白互作分析，可用于研究膜蛋白間及膜蛋白與胞質蛋白間的互作。在酵母細胞中，泛素可以分成兩部分表達，即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub)，后者融合有能啟動核內報告基因表達的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在細胞中組成可分離的泛素蛋白體系

客戶只需提供用于篩選的誘餌質粒信息，我們完成雜交篩選相關工作：
1. 誘餌載體的構建
2. 誘餌質粒的自激活檢測
3. 文庫質粒和誘餌質粒共轉酵母感受態細胞
4. 文庫篩選和3AT優化
5. 文庫篩選結果測序分析
6. 篩選結果回轉驗證
7. 詳細報告的整理和數據發送

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鐘鼎生物技術為廣大客戶提供從實驗設計到實驗報告一站式的技術服務，服務涉及分子生物學、生物化學、免疫學、蛋白質學等多個領域。在為廣大客戶提供技術服務的同時，免費接收技術咨詢，設計實驗方案，盡我們的所能，幫助客戶解決試驗中遇到的困難。同時鐘鼎生物提供價格實惠、品質優良的生物科研試劑，歡迎索取免費試用樣品。