軟瓊脂細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：

   1）材料的準(zhǔn)備和配置：

1) 準(zhǔn)備2×基礎(chǔ)培養(yǎng)基：去離子水溶解1 g粉末培養(yǎng)基和0.2 g碳酸氫鈉，終體積為50 ml，0.2 μm濾器過(guò)濾除菌。

1) 在100 ml去離子水中加入1 g的瓊脂，配制1%的瓊脂。在100 ml去離子水中加入0.6 g的瓊脂制備0.6%的瓊脂。高壓滅菌瓊脂溶液，可儲(chǔ)存在4°C，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)再次加熱到瓊脂完全溶解為止。

2. 鋪下層瓊脂

1) 松開(kāi)1%軟瓊脂的瓶蓋，微波加熱1-2 min，密切關(guān)注以防沸騰。繼續(xù)加熱，不時(shí)攪拌以混合，直到瓊脂完全溶解至澄清。

2) 把融化的瓊脂溶液和預(yù)熱的2×培養(yǎng)基放在42°C水浴鍋。6孔板每孔需要1.5 ml的瓊脂與培養(yǎng)基的混合物。為了保證足量的混合物，每個(gè)6孔板準(zhǔn)備12 ml混合物。首先加6 ml培養(yǎng)基到50 ml離心管中，再加6 ml的1%瓊脂溶液。顛倒離心管幾次以混勻，動(dòng)作輕快以防軟瓊脂過(guò)早凝固。

3) 5 ml血清移液管每孔加1.5 ml混合物，避免氣泡沉在底部。

4) 蓋上板蓋，室溫凝固30 min。

3. 鋪含有細(xì)胞的上層瓊脂

1) 下層瓊脂凝固后，開(kāi)始準(zhǔn)備上層瓊脂。首先，胰酶消化收集細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)，制備細(xì)胞懸液。按1000, 3000, 5000個(gè)細(xì)胞/ml制備細(xì)胞懸液(使用2×完全培養(yǎng)基配置，每孔需0.75 ml細(xì)胞懸液和0.75 ml瓊脂，共1.5 ml)。每孔按1.5 ml體積算，需要準(zhǔn)備12 ml的細(xì)胞懸液。

2) 微波加熱0.6%瓊脂，把融化的瓊脂溶液和3.3步驟制備的細(xì)胞懸液放在42°C水浴鍋。

3) 按1：1比例混合0.6% 瓊脂和細(xì)胞懸液，每個(gè)6孔板需要12 ml混合液。每孔1.5 ml。轉(zhuǎn)移6 ml細(xì)胞懸液到50 ml離心管中。然后加6 ml 0.6%的瓊脂。注意：混合液溫度要保持42℃，避免凝固。

4) 動(dòng)作迅速，用移液管吹打2-3次混勻混合液，然后用5 ml的血清移液管吸取5.5 ml的混合物。每孔加1.5 ml混合物，避免氣泡沉在底部。

5) 細(xì)胞/瓊脂混合物室溫凝固30分鐘，然后放入37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中。足夠的菌落形成所需時(shí)間因每個(gè)細(xì)胞系而異，通常為21 d左右（本實(shí)驗(yàn)周期為14 d）。

6) 瓊脂上層應(yīng)保持一層生長(zhǎng)培養(yǎng)基，以防止干燥。每星期加兩次100 μl的培養(yǎng)基。

4. 平板染色和菌落計(jì)數(shù)

1) 每孔加200 μl結(jié)晶紫染色15-20 min。

2) 菌落染色后，用成像儀拍攝照片并用圖像分析軟件計(jì)算菌落數(shù)。

提供結(jié)果：采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，柱狀圖結(jié)果分析； 軟瓊脂細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片

上海中喬新舟生物科技有限公司（官網(wǎng)：www.zqxzbio.com）成立于2011年，歷經(jīng)十多年發(fā)展，主要專(zhuān)注于細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品的研究和開(kāi)發(fā)，專(zhuān)注于為藥企、各類(lèi)科研機(jī)構(gòu)及CRO企業(yè)提供符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)、細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)試劑，胎牛血清和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)等。公司一直致力于為高等院校、研究機(jī)構(gòu)、醫(yī)院、CRO及CDMO企業(yè)提供細(xì)胞培養(yǎng)完整解決方案，這些產(chǎn)品旨在滿(mǎn)足細(xì)胞培養(yǎng)的多樣需求，確保實(shí)驗(yàn)和研究的有效進(jìn)行。引用中喬新舟（ZQXZBIO）產(chǎn)品和服務(wù)的文獻(xiàn)超數(shù)千篇。



產(chǎn)品服務(wù)

細(xì)胞資源：原代細(xì)胞、細(xì)胞株、干細(xì)胞、示蹤細(xì)胞、耐藥株細(xì)胞、永生化細(xì)胞等基因工程細(xì)胞。
試劑產(chǎn)品：胎牛血清、完全培養(yǎng)基（適用于原代細(xì)胞及細(xì)胞株）、無(wú)血清培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑、重組因子、胰酶和雙抗等等細(xì)胞培養(yǎng)所有實(shí)驗(yàn)相關(guān)產(chǎn)品。
技術(shù)服務(wù)：穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、原代細(xì)胞分離、特殊培養(yǎng)基定制服務(wù)、細(xì)胞檢測(cè)等。 
 

 
目前產(chǎn)品已經(jīng)暢銷(xiāo)國(guó)內(nèi)30多個(gè)省市，與客戶(hù)建立長(zhǎng)期的合作伙伴關(guān)系，共同實(shí)現(xiàn)成功。全體員工將不懈努力，繼續(xù)為科研人員提供優(yōu)良的產(chǎn)品和服務(wù)，致力成為全球細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的參與者。
  

企業(yè)愿景
致力于成為國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)業(yè)的佼佼者，生物醫(yī)藥領(lǐng)域上游原材料的優(yōu)良提供商。

企業(yè)使命
成長(zhǎng)為專(zhuān)業(yè)細(xì)胞系及原代細(xì)胞培養(yǎng)供應(yīng)商、專(zhuān)業(yè)細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)試劑生產(chǎn)商。
 
企業(yè)榮譽(yù)