技術原理與實驗步驟

蛋白免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術，這種技術是將蛋白質視為抗原，加入相對應的抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，從而達到分離和濃縮出特定蛋白質的目的。

蛋白免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。

服務流程

• 客戶提供血液、細胞、組織等樣品
• 樣品裂解，離心后收集上清
• 加入目的蛋白A抗體，孵育與目的蛋白A結合
• 加入連接有proteinA或G的瓊脂糖凝膠珠，孵育與抗體結合
• 離心，棄掉上清，沉底進行SDS-PAGE驗證
• 提交結果：抗體沉淀蛋白、蛋白SDS-PAGE及western blot驗證圖

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