microRNA簡介
microRNA（miRNA）是一類內(nèi)生的、長度約20-24個核苷酸的小RNA,是發(fā)夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成。其在細胞內(nèi)具有多種重要的調(diào)節(jié)作用。每個miRNA可以有多個靶基因，而幾個miRNAs也可以調(diào)節(jié)同一個基因。這種復雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡既可以通過一個miRNA來調(diào)控多個基因的表達，也可以通過幾個miRNAs的組合來精細調(diào)控某個基因的表達。隨著miRNA調(diào)控基因表達的研究的逐步深入，將幫助我們理解高等真核生物的基因組的復雜性和復雜的基因表達調(diào)控網(wǎng)絡。
葉民生物為您提供microRNA載體構建技術服務，您只需提供您要做的目的基因序列及ID號，本公司專業(yè)的技術人員為您完成microRNA靶位點序列設計分析、及microRNA載體構建；

microRNA載體構建的特點及優(yōu)點：
1. 超過70%成功阻斷：利用BLOCK-It RNAi Designer設計軟件，可快速高效地設計、克隆出雙鏈寡核苷酸序列，構建出含Pol II啟動子啟動的用于RNAi分析的載體，用于RNAi分析，100%保證提供不少于70%的有效阻斷（當以50nM轉染，而且轉染效率至少達80%時，一套中3條RNAi中至少有2條達到至少70%轉錄的阻斷）；
2. 簡單的表達跟蹤：可通過同-順反子表達Emerald Green Fluorescent Protein(EmGFP)和目的microRNA (miRNA)使得分析簡單以及報告因子活性與阻斷之間可靠的相關性
3. 多靶標阻斷：同-順反子（Co-cistronic）表達使得多個靶標同時阻斷并且產(chǎn)生綜合表現(xiàn)型。
4. 組織特異實驗選擇：通過選擇廣泛的目的載體或者Multisite Gateway應用，你可以加入你選擇的啟動子進行細胞內(nèi)應用或者體內(nèi)阻斷，在哺乳動物細胞中可進行瞬時或永久的microRNA表達；

microRNA載體構建技術服務流程：
1.microRNA靶點的預測
利用軟件得到的目的microRNA的預測靶點。
2.獲得microRNA對應DNA模板
根據(jù)提供的靶序列，合成兩條互補的單鏈DNA模板。或者，設計引物PCR擴增microRNA靶基因3’UTR序列。
3.microRNA靶序列克隆
將合成的兩條單鏈退火成雙鏈（具有粘性末端），或將PCR產(chǎn)物雙酶切，后連入經(jīng)過同樣雙酶切的miR-reporter載體中，連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌。
4.陽性克隆鑒定。
挑選轉化的菌落，PCR篩選含有插入片段的陽性克隆，測序驗證克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
5.準備質(zhì)粒，菌株
抽提驗證正確的質(zhì)粒，定量。準備含有正確質(zhì)粒的單克隆甘油菌株。
6.產(chǎn)品包裝，發(fā)貨
提供有microRNA靶序列的報告質(zhì)粒，并免費提供陰性對照一份。甘油保存菌株各一支。

 

上海葉民生物技術有限公司成立于2006年8月，是一家致力于為免疫診斷試劑提供高質(zhì)量抗原抗體等生物活性材料和相關試劑的生物企業(yè)。公司以上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院的相關單位為依托，經(jīng)營一系列診斷試劑用原料，產(chǎn)品具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、批間差小、單批量大等特點，被國內(nèi)外多家診斷試劑公司生產(chǎn)采用,并成為其診斷試劑原料長期供應商和合作伙伴. 公司充分利用高校資源和人才、技術等優(yōu)勢,充分利用科研成果，經(jīng)過幾年的不斷發(fā)展，已經(jīng)成為國內(nèi)抗原抗體主要供應商之一。葉民生物將秉著以技術創(chuàng)新帶動產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展思路和理念,立足國內(nèi)并逐步建立起一個涵蓋多個領域的生物企業(yè).在此我們真誠的希望能與更多具有優(yōu)勢互補的企事業(yè)相關單位及個人合作！