DNA快速提取試劑盒

應用范圍

a. 石蠟包埋組織（FFPE）；

b. 人的血液（新鮮貨EDTA抗凝血、血卡、帶血濾紙）；

c. 口腔拭子；

d. 人的毛囊；

e. 小鼠耳片、尾巴尖；

f. 魚鰭或魚肉。

DNA在細胞中總是與各種蛋白質結合在一起的。在分離DNA時遵循的原則是：保證DNA分子一級結構的完整性；排除其他分子污染。1.1DNA提取與純化  

實驗流程：

 

客戶須知：

 細菌、細胞樣品需新鮮培養；動物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮或-80℃速凍；提供量最低為組織：200mg；細胞：106；血液：300μl( 抗凝）；

 血液樣品在4℃下可保存一周，-20℃下可保存1個月；

 服務開始前，請與我們及時溝通，以安排科學地取樣及運輸樣本。

服務承諾：

a. 我方對實驗結果以及客戶所提供的資料保密，未經客戶許可，我方不得將客戶的實驗內容、實驗結果和相關信息對外公布。

b. 提供給客戶DNA樣品、電泳照片、OD值（1.7≤OD260/OD280≤2.0）測定結果以及詳細的電子版實驗流程及報告。

1.2 植物病毒的RNA提�。� 

大多植物病毒RNA為單鏈RNA，并且其極性與mRNA極性相同，植物病毒RNA提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。

材料

提純TMV病毒液（10mg/ml）。  

操作步驟

a. 取一eppendorf管加入提純TMV（10mg/ml)400ml，再加入等體積酚/氯仿，蓋緊管蓋后用手充分振蕩1分鐘，4℃下12000g離心10分鐘。

b. 吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有機相交界面無蛋白為止。

c. 吸取水相于新eppendorf心管，加入等體積氯仿，用手倒置離心管數十秒，4℃下12000g離心10分鐘。

d. 取水相，加入1/10倍體積的3mol/L NaAc(pH5.2)，2.5倍體積的冰冷乙醇，混勻，-20℃30分鐘。

e. 4℃下12000g離心15分鐘，小心棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉淀，4℃下12000g離心5分鐘。

f. 小心棄去上清液，沉淀真空干燥5分鐘或空氣干燥10分鐘，并溶于無RNA酶的雙菌水或TE緩沖液中。

g. 取10ml進行電泳分析，另10ml用于cDNA合成。

[注意]

1、整個操作應盡可能在低溫下進行。

2、由于病毒RNA鑲嵌于外殼蛋白里面，因此要充分剝去病毒外殼蛋白，一般需要多次進行酚/氯仿的抽提。

1.3動植物總RNA提取-Trizol法

材料

水稻葉片或小鼠肝組織。

操作步驟

Trizol法適用于人類、動物、植物、微生物的組織或培養細菌，樣品量從幾十毫克至幾克。用Trizol法提取的總RNA絕無蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑點分析，斑點雜交， Poly(A)+分離，體外翻譯，RNase封阻分析和分子克隆。

a. 將組織在液N中磨成粉末后，再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨，注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10%。

b. 研磨液室溫放置5分鐘，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，蓋緊離心管，用手劇烈搖蕩離心管15秒。

c. 取上層水相于一新的離心管，按每mlTrizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇，室溫放置10分鐘，12000g離心10分鐘。

d. 棄去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，渦旋混勻，4℃下7500g離心5分鐘。

e. 小心棄去上清液，然后室溫或真空干燥5-10分鐘，注意不要干燥過分，否則會降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中，必要時可55℃-60℃水溶 10分鐘。RNA可進行mRNA分離，或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。

[注意]

a. 整個操作要帶口罩及一次性手套，并盡可能在低溫下操作。

b. 加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。

1.4 動植物mRNA提取

材料

水稻葉片或小鼠肝組織。

由于mRNA末端含有多poly(A)+，當總RNA流徑oligo(dT)纖維素時，在高鹽緩沖液作用下，mRNA被特異的吸附在oligo(dT)纖維素柱上，在低鹽濃度或蒸餾水中，mRNA可被洗下，經過兩次oligo(dT) 纖維素柱，可得到較純的mRNA。

操作步驟

a. 用0.1mol/L NaOH懸浮0.5-1.0g oligo(dT)纖維素。

b. 將懸浮液裝入滅菌的一次性層析柱中或裝入填有經DEPC處理并經高壓滅菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床體積為0.5-1.0ml，用3倍柱床體積的滅菌水沖洗柱床。

c. 用1x柱層析加樣緩沖液沖洗柱床，直到流出液的pH值小于8.0。

d. 將（一）中提取的RNA液于65℃溫育5分鐘后迅速冷卻至室溫，加入等體積2x柱層析緩沖液，上樣，立即用滅菌試管收集洗出液，當所有RNA溶液進入柱床后，加入1倍柱床體積的1x層析柱加樣溶液。

e. 測定每一管的OD260，當洗出液中OD為0時，加入2-3倍柱床體積的滅菌洗脫緩沖液，以1/3至1/2柱床體積分管收集洗脫液。

f. 測定OD260，合并含有RNA的洗脫組分。

g. 加入1/10體積的3M NaAc(pH5.2)， 2.5倍體積的冰冷乙醇， 混勻， -20℃30分鐘。

h. 4℃下12000g離心15分鐘，小心棄去上清液，用70%乙醇洗 滌沉淀，4℃下12000g離心5分鐘。 

i. 小心棄去上清液，沉淀空氣干燥10分鐘，或真空干燥10分鐘。

j. 用少量水溶解RNA液，即可用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并貯存于-70℃）。

[注意]

a. mRNA在70%乙醇中-70℃可保存一年以上。

b. oligo(dT)纖維素柱用后可用0.3mol/l NaOH洗凈，然后用層析柱加樣緩沖液平衡，并加入0.02%疊氮鈉（NaN3）冰箱保存，重復使用。每次用前需用NaOH水層析柱加樣緩沖液依次淋洗柱床。 

1.5 質粒提取與純化 

 實驗流程：

 

客戶須知：

a. 細菌、細胞樣品需新鮮培養；動物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮或-80℃速凍；提供量最低為組織：200mg；細胞：106；血液：300μl( 抗凝）；

b.  請提供≥100ng的質粒樣品或含有目的質粒的菌種，以滿足瓊脂糖凝膠電泳檢測及轉化需要；

c. 公司只提供氨芐青霉素、卡那霉素和氯霉素抗生素；如果使用其它抗生素，需要您提供抗生素及抗生素的工作濃度；

d. 質粒鑒定（如酶切鑒定、PCR鑒定或測序鑒定等）費用另計；

e. 服務開始前，請與我們及時溝通，以安排科學地取樣及運輸樣本。

服務承諾：

a. 我方對實驗結果以及客戶所提供的資料保密，未經客戶許可，我方不得將客戶的實驗內容、實驗結果和相關信息對外公布。

b.  提供給客戶質粒（1.7≤OD260/OD280≤2.0）提取樣品、電泳照片、OD值測定結果以及詳細的電子版實驗流程及報告。