(一)原理： 體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)
胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細(xì)胞
分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)。
   細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代
后，一般經(jīng)過三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂
相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。細(xì)胞接種2～3天分裂增殖旺盛，是
活力最好時(shí)期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。
 
(二)操作：
1.將長成單層的原代培養(yǎng)細(xì)胞或HeLa細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺(tái)中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)液，加入少許消化
液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜)，靜置5～10分鐘。
2.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞，如果細(xì)胞變園，相互之間不再連接成片，這時(shí)應(yīng)立即在超凈臺(tái)中將消化液倒掉，加入
3～5ml新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細(xì)胞懸液。
3.將細(xì)胞懸液吸出2ml左右，加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養(yǎng)
箱中，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

(三)結(jié)果: 一般情況，傳代后的細(xì)胞在2小時(shí)左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，2～4天就可在瓶內(nèi)形成單層，需要再次進(jìn)行
傳代。

無菌操作中的注意事項(xiàng):在無菌操作中，一定要保持工作區(qū)的無菌清潔。為此，在操作前要認(rèn)真地洗手并用75％乙醇消
毒。操作前20～30分鐘起動(dòng)超凈臺(tái)吹風(fēng)。操作時(shí)，嚴(yán)禁說話，嚴(yán)禁用手直接拿無菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如
止血鉗、鑷子等去拿。培養(yǎng)瓶要在超凈臺(tái)內(nèi)才能打開瓶塞，打開之前用乙醇將瓶口消毒，打開后和加塞前瓶口都要在酒
精燈上燒一下，打開瓶口后的操作全部都要在超凈臺(tái)內(nèi)完成。操作完畢后，加上瓶塞，才能拿到超凈臺(tái)外。使用的吸管
在從消毒的鐵筒中取出后要手拿末端，將尖端在火上燒一下，戴上膠皮乳頭，然后再去吸取液體。總之，在整個(gè)無菌操
作過程中都應(yīng)該在酒精燈的周圍進(jìn)行。 

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南京歐際醫(yī)藥科技服務(wù)有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)藥研發(fā)外包的高科技公司，坐落于南京國際服務(wù)外包大廈，歐際醫(yī)藥秉承創(chuàng)新，合作，服務(wù)的企業(yè)文化，擁有醫(yī)學(xué)研究和創(chuàng)新藥物研發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)，公司建立了三個(gè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)：
1、醫(yī)學(xué)合作研究平臺(tái)
2、創(chuàng)新藥物研發(fā)平臺(tái)
3、臨床前藥理學(xué)研究服務(wù)
    醫(yī)學(xué)合作研究平臺(tái)可提供先進(jìn)的Luminex高通量蛋白質(zhì)定量檢測服務(wù)和相關(guān)一站式醫(yī)學(xué)合作研究服務(wù)。已與多家臨床機(jī)構(gòu)開展了轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究。
    創(chuàng)新藥物研發(fā)平臺(tái)建立了創(chuàng)新藥物活性篩選的多種疾病模型，如藥物篩選的細(xì)胞、分子和動(dòng)物模型，可提供抗腫瘤藥物、抗菌藥物、抗肝炎藥物、抗腎炎藥、抗關(guān)節(jié)炎藥物、抗糖尿病藥物、抗糖尿病藥物和免疫調(diào)節(jié)藥物活性篩選的服務(wù)。已為多家知名藥企、大學(xué)及研究所開展了創(chuàng)新藥物篩選服務(wù)。
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