相對定量的目的是測定目的蛋白在兩個或多個樣本中的表達量的相對比例,而不需要知道它們在每個樣本中的表達量。
舉例來說,如果研究項目中包括處理過的和未經處理的對照樣本,通常可以將未經處理的樣本指定為基準,規定其目的蛋白濃度為 100%,將經處理的樣本的定量結果除以對照樣品的定量結果,就可以計算各個處理樣本的蛋白含量相對于未處理樣品的百分比。
iTRAQ | 采用4種或8種同位素的標簽,通過特異性標記多肽的氨基基團,然后進行串聯質譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量 |
TMT | 該技術采用2種、6種或10種同位素的標簽,通過特異性標記多肽的氨基基團,然后進行串聯質譜分析,可同時比較2組、6組或10組不同樣品中蛋白質的相對含量。 |
Label-free | 通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩定同位素標簽做內部標準,只需分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。 |
SILAC | 分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸,細胞經5-6代倍增周期后,穩定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白質按細胞數或蛋白量等比例混合,經分離、純化后進行質譜鑒定。 |
2D雙向電泳 | 雙向凝膠電泳是將不同種類的蛋白質按照等電點和分子量差異進行高分辨率分離的分析方法。成功的二維電泳可以將2000到3000種蛋白質進行分離,是唯一能同時將上千種蛋白質同時分離和展示的方法,在蛋白質組學中發揮重要的作用。 |
DIGE熒光差異雙向凝膠電泳 | 熒光差異雙向凝膠電泳(DIGE)是一種在2D電泳之前標記蛋白質樣品的方法,可以對樣品間蛋白質豐度進行精確分析。 |