實(shí)驗(yàn)案例： YYYY細(xì)胞在XXXX基因干擾后的增殖及侵襲能力實(shí)驗(yàn)

第一部分：實(shí)驗(yàn)細(xì)胞篩選

一、免疫熒光實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)試劑 ：PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.4)，非免疫山羊血清，Triton X-100，BSA抗體稀釋液，XXXX蛋白一抗 (1:100)，二抗Alexa Fluor 555 goat anti-rabbit IgG (H+L) *2 mg/mL*(A21428)
免疫熒光（IF）染色：倒出細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS沖洗三次；2-4%甲醛固定15分鐘；1×PBS緩沖液（0.01 M，pH7.4）洗滌3次，每次5分鐘；滴加非免疫山羊血清（內(nèi)含0.3%Triton X-100）封閉液,覆蓋液面2-3mm,室溫放置60min，甩去多余液體；滴加一抗plscr1 50μL（1:100），4℃過夜；PBS洗3次，每次5分鐘；滴加熒光標(biāo)記的上述二抗50μL（1：200），室溫 60分鐘；PBS洗3次各5min；熒光顯微鏡下觀察、拍照，每指標(biāo)照相2套圖像。
IF染色結(jié)果（400倍）:通過熒光染色可以分析出，XXXX蛋白在YYYY細(xì)胞中表達(dá)量最突出。
YYYY細(xì)胞 

     
AAAA細(xì)胞   

     
BBBB細(xì)胞 

      
CCCC細(xì)胞

二、RT-PCR實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)胞樣品4份，分組編號(hào)（見圖片標(biāo)示）
試劑：Trizol Reagent,Invitrogen  Cat.NO.15596-026；ReverTra Ace-α-TM  First Strand cDNA Synthesis Kit ,TOYOBO #FSK-100；PCR Master Mix（2x） Fermentas # K0172；DNA Marker DL2，000， TaKaRa D501A；0.1% DEPC水、氯仿（分析純）、異丙醇（分析純）75%乙醇；AGAROSE(瓊脂糖)  AMRESCO，K499；10×DNA上樣緩沖液, 美國(guó)ProMab,SJ-R2008523；0.5mg/ml EB 溶液，實(shí)驗(yàn)室常備；1×TBE, 實(shí)驗(yàn)室常備，配方參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南 第二版》
儀器：PCR儀,ABI9600；電泳儀，北京六一儀器公司，DYCP-31DN型；高速離心機(jī)，湘儀H1650-W； 紫外分光光度計(jì)，上海江儀儀器有限公司，UV-7502C(751)；成像系統(tǒng)，柯達(dá)紫外顯相系統(tǒng) 400W像素
引物資料：

Homo- XXXX-F    5- cacccatgtctaccaaagtt -3，Homo- XXXX-R    5- ctctcaaaattccagtccag -3，片段長(zhǎng)度: 175bp
Homo-GAPDH-F   5-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3，Homo-GAPDH-R   5-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3，片段長(zhǎng)度   450bp

具體實(shí)驗(yàn)步驟以及詳細(xì)實(shí)驗(yàn)信息請(qǐng)參閱以下鏈接：

http://www.jiamay.net/vshow_28_1858.html

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