當前位置 > 技術服務 > 生物研發(fā)服務> 其他生物研發(fā) > 奶及奶制品中黃曲霉素M1專業(yè)解決方案
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Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)
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高效液相色譜法：
根據(jù)國標《GB 5413.37—2010》食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
實驗用前處理：
實驗儀器和好耗材包括：
恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實驗用試劑：色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件：
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高效液相色譜儀
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色譜柱
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C18柱，150*4.6mm，5um
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流動相
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乙腈－水（25：75）
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熒光檢測器：
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激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長435nm；
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柱 溫
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室溫
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流速
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1.0ml/min
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進樣量
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20ul
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出峰時間
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10分鐘左右
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樣品取樣：真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理：分不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度，離心用上清液過柱凈化；
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，高速均質(zhì)器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
干酪：稱取適量切細或粉碎，過篩用加純水溶解，高速均質(zhì)器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進行兩次萃取，然后用適宜的有機溶液萃取，取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后分頁漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟：完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。
注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材
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產(chǎn)品名稱
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說明
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規(guī)格
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黃曲霉毒素M1固體標準品
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參比對照使用
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100ug 1mg
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黃曲霉毒素M1液體標準品
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濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈
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1ml
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PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱
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用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素
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25/50T
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PriboFast泵流操作架（8位）
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用于免疫親和柱凈化樣品處理，方便控制流速
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黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙
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用于去除HPLC檢測時部分雜峰，有效提高靈敏度。110，1.5um
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100P
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不銹鋼均質(zhì)器
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高速勻漿樣品，有效提高萃取效率
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旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器
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酶聯(lián)免疫檢測法：符合國家標準
酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA，在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
1.我公司保證所提供的產(chǎn)品都是全新，未被使用的，在各方面都符合投標文件和招標所規(guī)定的質(zhì)量、規(guī)格和性能。
2.保修期：儀器驗收合格雙方簽字之日起儀器質(zhì)保壹年，終身維護。
3.安裝與調(diào)試：公司派出專業(yè)工程師免費上門安裝調(diào)試，免費為用戶進行至少一次關于使用、維修、保養(yǎng)等方面的集中現(xiàn)場培訓。
4.設備在安裝調(diào)試中所需的附屬材料等均由我公司免費提供。
5.儀器發(fā)生故障后與公司售后服務部聯(lián)系，半個小時內(nèi)給予答復或電話指導維修。
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