免疫蛋白印跡技術服務

WesternBlotting免疫蛋白印跡技術服務（代做wb實驗）WESTERNBLOT是以電泳分離組分，將其從凝膠轉移到一種固相支持體，繼之以針對特定氨基酸序列的特異性抗體作為探針檢測目的蛋白的一種分子生物學技術。免疫印跡immunoblotting又稱蛋白質印跡Westernblotting，它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。

本公司為您提供全套免疫印跡Westernblotting技術服務，全部實驗皆使用高質量試劑完成●

主要實驗步驟如下：

1.蛋白質抽提a.實驗對象為組織樣品，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。b.實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1?06～1?07細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。

2.蛋白質定量按KCTMBCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。

3.變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳SDS-PAGE將準備好的樣品液和生物素標記的蛋白質分子量標準分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。

4.蛋白質轉移到硝酸纖維膜或PVDF膜按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4癈轉移過夜。

5.膜的封閉和抗體孵育a．膜在5％BSA溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。b.封閉過的膜加入一級抗體室溫孵育1.5小時，抗原抗體結合。c.加入HRP標記的二級抗體以結合一級抗體及HRP標記的抗生物素抗體以結合分子量標準，室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。

6.結果檢測化學發光法檢測，膜與化學發光底物孵育，經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用ImageJ分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數字化。

7.數據分析目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。

8.提供實驗報告包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關圖表

北京德元國際科技有限公司
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