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NEPA21原位貼壁電轉(zhuǎn)人原代脂肪前體細(xì)胞成功

瀏覽次數(shù):5404 發(fā)布日期:2013-3-29  來(lái)源:本站 本站原創(chuàng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處

      人脂肪前體細(xì)胞(Human Preadipocytes,HPAd)來(lái)源于人脂肪組織,呈成纖維狀,經(jīng)誘導(dǎo)可分化為成熟的脂肪細(xì)胞(Human Adipocytes,HAd)。HPAd來(lái)源的HAd常被用來(lái)研究胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、生長(zhǎng)激素增強(qiáng)的脂類(lèi)分解以及肥胖基因的表達(dá)等。HPAd和HAd可用于體外研究肥胖的原因和治療、II型糖尿病以及心血管疾病的模型。有趣的是,源于人網(wǎng)膜脂肪組織的HPAd和HAd在脂類(lèi)分解和leptin表達(dá)上與源于皮下脂肪組織的存在顯著差異。
      眾所周知,原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染是不容易實(shí)現(xiàn)的,HPAd同樣如此,普通的轉(zhuǎn)染試劑,如脂質(zhì)體等,基本轉(zhuǎn)不進(jìn)去,即使用病毒感染,效率也很低。電轉(zhuǎn)染理論上可以作用于任何種類(lèi)的細(xì)胞,但是由于技術(shù)的限制,電轉(zhuǎn)染技術(shù)一直未能在動(dòng)物細(xì)胞領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。NEPA21采用全新設(shè)計(jì)的電轉(zhuǎn)程序,特別適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、離體組織或動(dòng)物活體的轉(zhuǎn)染。配合獨(dú)有的電壓衰減(Voltage Decay)設(shè)計(jì),NEPA21可在獲得高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí),提高細(xì)胞存活率。

      2013年3月27日,華粵行細(xì)胞生物學(xué)團(tuán)隊(duì)在南京醫(yī)科大學(xué)進(jìn)行的人脂肪前體細(xì)胞進(jìn)行的原位貼壁電轉(zhuǎn)DEMO,盡管電轉(zhuǎn)前細(xì)胞融匯度已經(jīng)近乎100%,可是最佳轉(zhuǎn)染程序組的轉(zhuǎn)染效率仍能達(dá)到約35%,細(xì)胞存活率在95%以上。兩個(gè)課題組的老師對(duì)電轉(zhuǎn)染的效果給予了高度的評(píng)價(jià)。

 

 

     3T3-L1(Mouse embryonic fibroblast - adipose like cell line)雖為脂肪前體細(xì)胞系,但是用普通的轉(zhuǎn)染方法,同樣不容易獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。而電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示(如下圖),NEPA21可以高效地轉(zhuǎn)染該種細(xì)胞及其分化成熟的脂肪細(xì)胞。

 
Preadipocytes, Fibroblast like before differentiation(In Suspension)

 

Adipocyte-like after differentiation(In Adherence)

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