培養細胞的你，是否經常發現自己養的細胞怎么都不如文獻中的漂亮？

實驗是科研的基礎，看似簡單重復的實驗操作，其中卻有很多技巧和細節。有的人可以快速掌握，并悟得先機，有的人則是日復一日的機械性操作。經驗藏著掖著不如分享出來，獨樂樂不如眾樂樂。如果你是細胞培養中的高手，快來參加“如何把細胞養得更漂亮”經驗分享活動吧，在分享經驗造福廣大科研汪的同時，還可以贏得心動大獎。

1.活動規則

您在養細胞的路上總有或多或少的心得體會，分享一下如何把細胞養得更漂亮的小妙招，就有機會贏得心動大獎哦！您的分享將成為其他科研汪的指南針，加速細胞生物學研究進展，造福全人類�？靵韰⒓舆@個偉大的活動吧！

2.評選規則

賽業生物在干細胞領域已深耕13年，擁有國際一流的干細胞產品研發和生產團隊。賽業生物的專家團成員具備豐富的細胞培養經驗，專家團成員將根據參賽者提交內容的詳細程度，價值高低評選出一二三等獎。

3.大賽日程

投稿時間：2019年10月14日——2019年11月30日

評選時間：2019年12月1日——2019年12月6日

獲獎公示：2019年12月12日

4.獎項設置
5.主辦方聲明

1、本次大賽無參賽費，不退稿，如參賽者所提供的作品違反任何中國現行法律法規或者侵犯第三方合法權益而導致任何爭議、索賠、訴訟等后果，由選手本人承擔全部法律責任，大賽主辦方賽業（廣州）生物科技有限公司不承擔任何法律責任。

2、所有參賽作品都將被視為授權大賽主辦方無償用于大賽及相關活動的宣傳和推廣。但賽業承諾：不會私自發表文章/出售參賽作品。

3、本次大賽的最終解釋權歸賽業（廣州）生物科技有限公司，主辦方有權對參賽規則進行調整，調整結果將第一時間在大賽專題網站進行通知。

6.拋轉引玉

（1）文獻案例尋找啟發

想要做好實驗，好用的產品必不可少。賽業生物專注干細胞領域13年，干細胞系列產品因優良的增殖和分化潛能已助力廣大科研工作者取得豐碩的科研成果，產品也競相見諸于各大期刊，累積超過3000多篇論文引用。如何把細胞養得更漂亮？希望賽業客戶發表的文獻案例能給你一些啟發。
Sihan Lin, Wenjie Zhang, Xinquan Jiang. et al. A Magnesium-Enriched 3D Culture System that Mimics the Bone Development Microenvironment for Vascularized Bone Regeneration. Advanced Science. 2019 DOI: 10.1002/advs.201900209
Immihan Ceren Yasa, Ahmet Fatih Tabak, Oncay Yasa, Hakan Ceylan, Metin Sitti. 3D-Printed Microrobotic Transporters with Recapitulated Stem Cell Niche for Programmable and Active Cell Delivery. Advanced Functional Materials 2019, 148, 1808992. DOI: 10.1002/adfm.201808992.
Ren Xu, Alisha Yallowitz, An Qin. et al. Targeting skeletal endothelium to ameliorate bone loss. Nature Medicine 2018 DOI: 10.1038/s41591-018-0020-z

7.賽業專家們的小建議

A.復蘇小妙招

復蘇過程非常關鍵，直接影響這一株細胞的生長狀態和傳代能力。一般而言，復蘇就是將細胞株從液氮中拿出來后立刻放入-80°C冰箱數分鐘，待液氮揮發后迅速放入37振蕩水浴，俗稱“快融”過程，這一過程就是盡快融解細胞內的冰晶，減少對細胞的損傷。下一步就是將細胞放入培養基，一種方法是直接加入到培養基，待第二天細胞貼壁后更換新鮮的培養基；第二種方法是加入數倍體積的培養基混勻后，低速離心去掉對細胞有毒害作用的DMSO，然后把細胞接種到培養皿中。

B. 消化過程注意事項

消化過程會破壞細胞表面蛋白，從而影響細胞狀態。目前使用較多的操作是，吸走培養基后先用PBS洗1-2遍，然后加入胰酶進行消化，消化到細胞變圓、少量細胞脫落即可加入培養基進行終止。接下來是離心，除去上清。加入適量培養基將細胞吹勻，再轉移到培養皿的過程也很關鍵。吹打過程中用力要適度，既要避免用力過小細胞未分散，又要避免用力過大細胞懸液沾黏管壁造成損失，還要避免吹打過多機械剪切力傷害細胞。接種細胞后要適度搖晃培養容器，讓細胞分布均勻。對于接種的細胞，在空間允許的條件下，盡量平放不要堆著放。此外，關培養箱時需盡量輕柔，有時候細胞出現同心圓分布的情況，就是由于關門太用力，導致培養基晃動，形成紋路。

C. 凍存注意事項

一般情況下，凍存的細胞越多越好。培養中的細胞，建議在細胞狀態好、增殖迅速時就凍存一些，而不是養過很多代用不完再凍存。細胞消化離心去上清后加入細胞無蛋白非程序凍存液調整密度到1×106cell/mL，然后轉入凍存管，直接放入-80冷凍過夜，注意凍存管擺放不能過于密集，以免處于內部位置的細胞凍存效果差。凍存完成后轉入液氮中長期保存。細胞不要長期保存在-80冰箱，以免活力下降。

D. 其他注意事項

除上述的主要操作步驟以外，常用的試劑存儲也很重要。FBS正常存儲溫度是-20，在要使用之前先放到4融化，如果放到室溫或者水浴鍋中融解，血清中的蛋白會大量析出從而影響培養效果。另外胰酶需盡量分裝保存，胰酶在室溫下失活很快，近期用的放在4，其他就存儲在-20。最后就是細胞需要及時傳代和換液，通常為2-3天一次。過于頻繁會影響細胞生成長微環境，間隔過長則會有營養匱乏、酸堿度失衡等問題。

8.經驗分享展示

2019年12月12日公布經驗分享及獲獎名單，敬請期待哦