1.在熒光定量PCR技術(shù)中，有一個很重要的概念—— Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。
    

2.熒光域值（threshold）的設(shè)定

PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。

3. Ct值與起始模板的關(guān)系

    研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標代表Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。

4.熒光化學(xué)　　

熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：

    (1）TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’－3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。

    (2）SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。

佰而林熒光定量PCR/RT-PCR實驗流程:

1. 根據(jù)基因序列設(shè)計特異性的引物和熒光探針。

2. 提取 DNA/ RNA 。

3. Real Time PCR熒光定量PCR，進行實驗結(jié)果分析

4. 本公司提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及

引物等實驗資料。

佰而林生物科技有限公司，是一家由歸國留學(xué)專家創(chuàng)辦的專注于生命科學(xué)領(lǐng)域的高科技企業(yè)。公司提供覆蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域的實驗室產(chǎn)品、生物技術(shù)服務(wù)以及專業(yè)生物統(tǒng)計分析等咨詢服務(wù)，致力于為客戶在生命領(lǐng)域探索創(chuàng)造有利條件。經(jīng)過三年的高速發(fā)展，已經(jīng)在全國重點城市都成立了辦事處，與當?shù)乜蒲性盒１３种鴱V泛的合作。

佰而林提供覆蓋臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、病理學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域的生物技術(shù)服務(wù)，包括熒光定量PCR、免疫印跡、ELISA、流式細胞術(shù)、免疫組化、動物造模等。公司技術(shù)人員均具備本科以上專業(yè)背景，為客戶提供強大的技術(shù)保障。

佰而林廣州實驗中心擁有強大的技術(shù)團隊，公司員工研究生以上學(xué)歷占比30%，本科以上學(xué)歷占比100%。公司配備先進科研儀器設(shè)備如：AKTA蛋白純化系統(tǒng)、流式細胞儀、激光共聚焦顯微鏡、液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）系統(tǒng)、luminex200、制備兼分析型高效液相色譜儀、酶聯(lián)斑點圖像自動分析儀、實時熒光定量PCR儀等。

佰而林的服務(wù)宗旨是提升客戶的研發(fā)技術(shù)質(zhì)量，降低客戶的研發(fā)總體成本，縮短客戶的研發(fā)整體周期。讓我們專業(yè)的技術(shù)團隊，為您的成功，助一臂之力。