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甲基化檢測
直接測序法來判斷是否CpG位點發生甲基化。
服務類別:分子與細胞總訪問:1645
最后更新:2012-4-3半年訪問:5
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    DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化學性修飾堿基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位點,它在基因組中呈不均勻分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區域,在哺乳動物中mC約占C總量的2-7%。一般說來,DNA的甲基化會抑制基因的表達。DNA的甲基化對維持染色體的結構、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發生發展都起重要的作用。
    我們利用重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,而在適當的實驗條件下甲基化的胞嘧啶保持不變,再進行PCR擴增,甲基化的位點可以被當作一個C/T的SNP來處理;可利用直接測序法來判斷是否CpG位點發生甲基化。
(1)服務流程
1)基因組DNA的提取,利用瓊脂糖凝膠電泳明確所提基因組DNA的純度
2)亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA:雙鏈DNA變性解鏈后,在HSO3-作用下,C若已有甲基化則無此改變;若DNA CpG島若無甲基化,則序列中的改變為C→U,CG→UG
3)修飾后DNA純化回收,并進行引物特異性的PCR
4)對PCR產物進行測序并且與未經處理的序列比較
(2)您需要提供
待分析的基因組區域信息;用于提取基因組DNA的組織材料。
(3)我們提供
特異性位點的DNA甲基化的檢測結果。
(4)質量保證
1)可避免樣本偏差,在重亞硫酸鹽轉化步驟后得到更高的定量結果的數據質量
2)引物設計運算法專為甲基化研究而優化,可提供更快的引物設計,及更高的PCR成功率
 

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