實時熒光定量PCR技術(Real Time Quantitative PCR)于1996年推出。該技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,可對目標DNA分子起始拷貝數精確定量。因其檢測方法精確、靈敏、污染途徑少,已成為國際公認的核酸分子定量的標準方法,應用到多種研究中,如藥物處理前后細胞mRNA表達量變化、不同組織mRNA表達量差異、基因芯片結果驗證、RNAi效果確認(SiRNA篩選),病毒、病原菌等致病微生物拷貝數定量及各種生物制品食品安全鑒定。
作為一種新型的PCR技術,Real-Time PCR技術將熒光信號強弱與PCR擴增情況結合在一起,與通過監測PCR反應管內熒光信號的變化來實時觀測PCR反應進行的情況,解決了傳統PCR難以對擴增起始模板的量進行測定的難題,并具有快速、避免交叉污染等特點。
(1)服務流程
1)根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針
2)提取DNA/RNA
3)以DNA為模板,對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析
4)提供實驗分析結果
(2)您需要提供
1)提供新鮮的且盡量多的材料,或直接提供純化好的總RNA(大于5 ug/樣品);
2)提供已知的全長基因序列
3)提供盡可能詳細的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等
(3)我們提供
提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線、熔解曲線及詳細的實驗步驟
(4)質量保證
1)嚴格進行PCR優化,利用熔解曲線分析保證產物的特異性
2)針對每個樣品目的基因的熒光定量 PCR均進行三孔平行實驗,保證實驗結果的準確性