背景介紹:在甲基轉移酶的催化下,DNA的CG兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見于基因的5'-CG-3'序列。大多數脊椎動物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5'端的非編碼區,并成簇存在。甲基化位點可隨DNA的復制而遺傳,因為DNA復制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點進行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。 DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控。脊椎動物DNA的甲基化狀態與生長發育調控密切相關,比如在腫瘤發生時,抑癌基因CpG島以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態,導致抑癌基因表達的下降。
服務內容:
1.甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明被檢測的位點不存在甲基化。
2.用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶,最后對PCR產物進行測序就可以判斷CpG位點是否發生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產物克隆至載體后進行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱為BSP-克隆測序法。
樣品要求
1.若提供基因組DNA,需≥2ug。
2.若提供的材料為新鮮組織、血液、細胞等生物材料,請提供足夠提取2ug以上基因DNA的材料量。
3.基于所選擇的DNA甲基化檢測方法,請提供相應的引物或引物序列。
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海諾倫生物醫藥技術有限公司(Shanghai Novland Co.,Ltd.)是從事生物醫藥及疾病檢測相關的高新技術企業。致力于疾病的核酸及生化檢測,以及生物醫學方向的各類產品的研發、生產和銷售的高科技生物技術公司。立足現有的技術優勢和成本優勢,經過公司全體員工的一致努力,定向于前沿的疾病檢測技術的科研類產品,包括腫瘤相關的MicroRNAs、基因核酸檢測試劑盒開發和相關檢測服務,流行性疾病的病毒檢測試劑盒開發及相關檢測服務,在科研方向我們不斷追求更高品質的技術,研制高品質的產品,并將科技轉化為技術,技術轉化為產品,以科技為依托,建立為廣大科研工作者服務的科技產品和服務體系。公司是以研發為主導的高科技性質企業,致力于生物學各類試劑以及疾病的檢測技術的不斷探索和創新,創建了服務于科研工作者的生化試劑以及臨床體外診斷試劑研發技術平臺,逐步推進試劑的“系列化”、“一體化”發展目標、內外兼修、精細致遠。