服務項目:無菌細胞分選: 各種細胞系、原代細胞、腫瘤組織單細胞懸液等; 本儀器以分選為主,還承接流式分析實驗,建議事先使用其它流式細胞儀確認細胞陽性染色比例。 如特殊情況確需本儀器分析的,請聯系管理員。
原代細胞分選樣本制備基本流程: 獲取細胞懸液→熒光抗體染色→調整細胞濃度(參考Table 1)→過濾細胞→移入流式管→避光置冰上運至分選室→上機檢測并設定分選條件→分選細胞→上機回測,檢測純度。
注:原代細胞分選前的細胞一定要過濾過(一般用300目濾網),否則會堵機器的。
分選所用的細胞染色方法與分析所用方法基本相同,但需要注意以下幾點: a) 保證樣本的無菌狀態,因為分選得到的細胞還要繼續培養; b) 不能使用固定劑固定細胞,因為活細胞經固定劑處理后即死亡; c) 保證上機樣品為單細胞懸液; d) 準備充足的細胞,詳見Table 1; e) 建議分選上樣管中的緩沖液使用含2% FBS的PBS,普通培養基中的酚紅可能會干擾分選;若 2 用培養基的話,顏色不能太深,血清濃度不能超過2%,否則粘性太大影響分選。 f) 如細胞分選后需再次培養,請準備含血清的收集管,在分選前交操作員。建議在5ml離心管中 加入1-2ml血清及其它必需組分,保證分選完畢時血清濃度大于5%; g) 如要分選GFP等轉染的樣品,請提供未經轉染的相同細胞為陰性對照; h) 如要做多重熒光染色標本的分選,請提供各種單一熒光染色的標本; i) 如要去除死細胞,在不影響后續實驗前提下,可以加入7-AAD或是PI; j) 快速簡便的樣本處理有利于分選:處理好的樣本盡快上機,分選好的細胞盡快下一步實驗,如 果要分選多個樣本,建議一次處理一個,估計可能的上機時間后,再處理第二個樣本
注意事項:由于在分選過程中,樣本可能通過液滴震蕩產生氣溶膠,所以不接受會傳播人類病原 菌的生物有害樣本,也不接受含放射性生物樣品。
本實驗室所有儀器為MoFlo Astrios 超高速流式細胞分選系統是繼MoFloTM XDP超速流式細胞分選系統之后的又一力作,效率及靈敏度更高,可應用于研究人員高效安全的生物解決方案。MoFlo Astrios 超高速流式細胞分選系統利用原始MoFlo技術和MoFloTM XDP的電子處理,其七個針孔空間分隔每個激光,提供了靈活可擴展的MoFlo分選功能。此外,MoFlo Astrios的超速流式細胞分選和多色分析的性能極佳,合理的人體工程學設計使它操作更快、更容易。
MoFlo Astrios超高速流式細胞分選系統是目前世界上最先進的流式細胞分選系統,實現了分選速度,分選純度及回收率的完美平衡,最多可選包含散射光信號內的50個參數的信號(同時采集32個參數信號),分選速度也>70000細胞/秒的水平