慢病毒包裝
產品介紹:
慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統,它能高效的將目的基因(或RNAi)導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈 RNA,其基因組進入細胞后,在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后 的DNA轉錄mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白;或產生RNAi干擾。
慢病毒載體介導的基因表達或RNAi干擾作用持續且穩定,原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中,并隨細胞基因組的分裂而分裂。另外,慢病毒載體能有效感 染并整合到非分裂細胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比,比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關病毒載體、只整合分裂細胞的傳統逆轉錄病毒 載體,有鮮明的特色。大量文獻研究表明,慢病毒載體介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、巨噬 細胞等。
慢病毒載體不表達任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位無細胞免疫反應,體液免疫反應也較低,不影響病毒載體的第2次注射。
技術特點:
1、將目的基因/RNAi基因轉入難以轉染的細胞,比如神經元細胞、干細胞或其它原代細胞;
2、制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株;
3、將目的基因/RNAi基因轉入動物組織,以期獲得長期表達;
4、轉基因動物,特別是轉基因大鼠的制備。
服務流程:

A. 慢病毒載體的構建:
根據不同的研究需求構建慢病毒載體,如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達的慢病毒載體、用于啟動子活性研究的慢病毒載體等;
B. 慢病毒包裝過程:
將重組病毒質粒及其輔助包裝質粒共轉染至包裝細胞中,收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液,在293T細胞中測定并標定病毒滴度。
應用案例:
bio-equip.com
廣州艾游生物科技有限公司位于廣州高新技術開發區科學城,是一家以科研為基礎,集產品研發、技術服務和貿易為一體的綜合性生物技術服務企業。成立以來,艾游生物依靠自身優秀的研發、生產、營銷和服務團隊,為國內科研院校、臨床醫院、制藥企業、生物技術企業和政府所屬科研機構等提供優質、高效的全方位科研實驗與產品銷售服務。
艾游生物當前核心服務包括分子生物學(載體構建、基因釣取、RT-PCR、引物設計等)、蛋白組學(Western blotting、ELISA、蛋白表達與純化、耦聯、免疫熒光等)、細胞生物學(瞬時轉染、穩定轉染、細胞凋亡雙螢光檢測等)、抗體制備(單克隆與多克隆抗體的制備等)。艾游生物的目標是通過專業的技術服務,承擔一站式整體科研服務外包,幫助科研人員快速高效地完成課題實驗,使科研人員有更多的時間和精力去專注于創新的研究,加速生物與醫藥產業的發展。
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服務宗旨:
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服務理念:
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艾游生物代做實驗,專業提供實驗技術服務,服務具體如下:
分子生物學:
1.基因突變
定點突變 缺失突變
2.T載體構建
3.表達載體構建
基因釣取 引物設計 載體購買 DNA抽提 RNA抽提 RT PCR 膠回收 質粒抽提 雙酶切 連接
4.實時定量熒光PCR
絕對定量 mRNA表達定量 DNA芯片數據驗證 siRNA篩選 MicroRNA表達定量
5.SNP分型
PCR技術
蛋白檢測:
1.ELISA 2.免疫組化 3.免疫熒光 4.Western blotting 5.明膠酶譜
蛋白相互作用
1.Co-IP 2.GST-pull down
蛋白表達與純化
1.原核表達 2. 蛋白純化 3.蛋白偶聯 4.抗體純化
表觀遺傳學(基因表達調控的研究)
1.啟動子載體構建 2.啟動子甲基化 3.雙螢光素酶報告基因檢測 4.EMSA 5.ChIP
細胞生物學
1.瞬時轉染: 基因、SiRNA、microRNA
2.穩定轉染
3.細胞凋亡
4.細胞活力測定
5.雙螢光檢測
6.流式細胞檢測
SiRNA
1.ShRNA設計與合成
2.ShRNA篩選
3.shRNA表達載體的構建
病毒包裝
1. 慢病毒載體構建及包裝服務
2.腺相關病毒載體構建及包裝服務
3.腺病毒載體構建及包裝服務
抗體制備
1.單克隆抗體制備
表達載體構建、蛋白純化、蛋白偶聯、proteinG法純化抗體、抗體檢測-western-blot、雜交瘤細胞株制備
2.多克隆抗體制備
microRNA功能及表達調控
1.microRNA表達譜系分析
組織、細胞
2.microRNA功能及表達調控
功能鑒定、靶基因篩查、表達調控研究
PCR-array
細胞凋亡PCR-array
