服務特點
1、根據客戶實驗需要靈活定制慢病毒載體包裝服務,滿足客戶研究的多種需要。
2、慢病毒純化服務根據實驗要求不同,包括細胞實驗級純化和活體實驗級純化,您可以根據具體需要選擇不同的純化方式,幫助您節約實驗成本。
3、病毒滴度測定采用熒光細胞流式細胞技術或者感染細胞基因組DNA RT-PCR檢測,病毒滴度直接體現病毒感染效果。比采用檢測p24或者病毒顆粒計數更加準確可靠。
慢病毒包裝步驟
1、慢病毒載體質粒和包裝質粒質粒共轉染293T細胞;
2、培養48~72h,收集培養上清;
3、病毒純化和濃縮;
4、滴度測定、目的基因檢測;
5、出具檢測報告;
6、干冰運輸發貨。
慢病毒純化
根據客戶需求,對不同用途的慢病毒產品,我們分別采用細胞實驗級和活體實驗級兩種純化方式。細胞實驗級純化采用超速離心法對病毒顆粒進行純化濃縮。這種純化方法的優點在于純化價格比較低,產品質量能滿足細胞實驗需要。但由于純化方法相對比較劇烈,最終的純化產品中存在一些碎裂的病毒成分如病毒蛋白、以及少量殘留細胞培養產物和助沉淀劑。這些成分在用于活體實驗時可能會引起動物的免疫反應,但在細胞實驗中一般不會產生影響。
活體實驗級純化采用溫和的親和層析純化,極少發生病毒碎裂從而大幅減少病毒蛋白釋放。由于對病毒顆粒的選擇性親和,雜質蛋白和成分極少,一般不會引起實驗動物免疫反應,適合用于活體實驗。
滴度測定
1、帶有GFP或DsRED熒光標簽的慢病毒載體。采用病毒感染細胞后直接進行流式細胞計數,計算病毒滴度。
2、不帶熒光標簽的慢病毒載體。采用病毒感染細胞后,提取細胞DNA,進行實時定量PCR,計算進入細胞的病毒DNA拷貝數。
以上兩種檢測方法通過對病毒感染的活細胞數量計數,直接體現病毒的感染力,即有活性的病毒數量。常見的病毒滴度檢測方法如病毒顆粒計數和p24檢測,無活力病毒和病毒蛋白碎片也會進入計數范圍。滴度不能反映病毒的使用效果。
產品質量控制
質量指標包括:
* 載體質粒構建檢測
* 產品無菌檢測
* 滴度檢測
* 目的基因的PCR檢測
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