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MicroRNA (miRNA) 熒光定量PCR服務

MicroRNA (miRNA) 熒光定量PCR服務


microRNA Real-Time PCR Assay
由于miRNAs在眾多程序的調控,諸如發育、細胞增殖和凋亡以及腫瘤發生相關等領域發揮作用,因此miRNAs的鑒定和定量研究成為迅速發展的研究領域。
服務類別:分子與細胞總訪問:1264
最后更新:2012-4-3半年訪問:4
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一、什么是miRNA?

MicroRNAs (miRNAs)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關。據推測,這些非編碼小分子RNA(miRNAs)參與調控基因表達,但其機制區別于siRNA介導的mRNA降解。第一個被確認的miRNA是在線蟲中首次發現的lin-4 和let-7,隨后多個研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出數百個miRN As 。
 
二、miRNA熒光定量PCR基本原理
實時熒光定量PCR技術是在PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。但是就成熟的microRNA而言,由于其是由21-25個核苷酸組成的小RNA,長度太短,并不能通過傳統的實時定量PCR進行檢測,但是通過特殊設計的莖環結構的反轉錄引物,配合實時定量PCR引物及探針可以精確檢測微量樣品中microRNA表達水平,也可以用終點PCR法定性檢測。

 

 

三、Micro RNA熒光定量PCR優點:
microRNA
實時定量PCR是一種最近才發展起來的檢測技術,其技術細節還在不斷完善中,但是microRNA 實時定量PCR檢測系統,相對其它microRNA檢測技術有以下優點:
1.
高特異性
只對成熟 microRNA 進行定量,有效區分成熟 microRNA分子和前體分子以及其它成熟 microRNA的同源分子;
2.
簡便快捷 省時省力
整個操作只需兩步,不到3個小時,即可獲得高質量的數據;
3.
檢測靈敏 節省樣品
樣品消耗少,僅需 1-10ng 的總 RNA50pg左右的 microRNA
4.
超寬的線性范圍,可跨越 7 個數量級;

四、Micro RNA熒光定量PCR服務要求
1. 盡可能提供新鮮的、充足的材料或直接提供純化好的總
RNA (大于 5 ug/ 樣品),直接純化好的D NA 也要大于 5 ug/ 樣品。
2.
通過 E-mail或其它方式提供已知的全長基因序列。
3.
請盡可能提供詳細的背景資料: DNA/ RNA 來源、豐度等。

五、Micro RNA熒光定量提供服務
1.
根據客戶提供基因序列設計引物。
2.
幫助客戶提取Micro RNA
3. Real Time PCR(
熒光定量PCR),實驗結果分析
4.
實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料

 

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